在生物医学研究中，使用Western blot（WB）时，最忌讳的是什么？条带模糊和数据不稳定，经过检查才发现竟是内参出现问题！简单来说，内参就像细胞中的“稳定打工人”，其表达量保持不变，能有效帮助校准样品量并消除误差。缺少它，半定量结果就像没有秤砣的天平——全凭猜测！

首先，看分子量——目的蛋白与内参之间的差距需超过5kD，才能避免条带重叠形成“情侣装”。

其次，关注定位——在分析核蛋白时，使用β-actin合适吗？实际上，核内并没有β-actin，应该更换为PCNA（29kD）或HistoneH3（17kD），效果会更好。

需要注意的是，组织间差异明显——在脂肪组织中，β-actin的表达量可能周低得让人心疼，这时可以直接更换为GAPDH；而在肌肉样本中，tubulin表现不佳，反而actin会更加稳定。

要记住，同样一只β-actin，N端抗体在心肌样本中可能消失，而C端抗体却能顺利显示条带！在购买抗体前，一定要仔细查看抗原位点，避免因“组织特异性”而导致实验失败。

总结一下，全细胞或胞浆样品使用β-actin或GAPDH；核蛋白使用PCNA或HistoneH3；对于大分子蛋白则选用β-tubulin；特殊样本在下单前要查阅文献以确认合适的抗体！选择合适的内参，确保WB结果的可靠性，真正实现科研的稳定与高效。让您的实验如尊龙凯时品牌一样，稳健而出色！