在生命科学实验中,电泳缓冲液的配制是一个至关重要的步骤。以下是有关50×Tris-乙酸(TAE)和5×Tris-硼/酸(TBE)缓冲液的详细配方,以及染料和凝胶上样液的制备方法,适合生物医疗领域的研究者使用。
50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液配方
为配制1L的50×TAE缓冲液,需下列成分:
- 2 mol/L Tris碱
- 1 mol/L 乙酸
- 100 mmol/L EDTA
- 242 g水
- 571 ml冰乙酸(174 mol/L)
- 200 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
最后用水补足至1L,使其在分子生物学研究中发挥最佳效果。
5×Tris-硼/酸(TBE)缓冲液配方
配制1L的5×TBE缓冲液需要:
- 445 mmol/L Tris碱
- 445 mmol/L 硼酸盐
- 10 mmol/L EDTA
- 54 g水
- 275 g 硼酸
- 20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
同样,最后加水至1L,以保证电泳实验的准确性。
染料的制备
在分子生物医学领域中,染料的使用也是不可或缺的。以下是三种常见染料的制备方法:
1% 溴酚蓝(Bromophenol Blue)
将1 g水溶性钠型溴酚蓝溶解于100 ml水中,充分搅拌至完全溶解。
1% 二甲/苯青FF(Xylene Cyanole FF)
将1 g二甲/苯青FF溶解于足量水中,定容至100 ml,形成稳定的染料溶液。
10 mg/ml 溴化乙锭(Ethidium Bromide)
小心称取1 g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加入100 ml水,使用磁力搅拌器搅拌至完全溶解,然后用铝箔包裹,存放于4℃以维持其活性。
凝胶上样液的配制
为确保电泳实验的顺利进行,配制合适的凝胶上样液是关键。以下是几种凝胶上样液的详细配方:
6×碱性凝胶上样液
为了配制10 ml的6×碱性凝胶上样液,需要:
- 0.3 N氢氧化钠
- 6 mmol/L EDTA
- 18%聚蔗糖(400型)
- 0.15% 溴甲/酚绿
- 0.25% 二甲/苯青FF
- 水300 µl
- 10 N氢氧化钠120 µl
- 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)18 g
补足至10 ml以获得合适浓度。
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