尊龙凯时活性定义1:活性单位(U)是指在50μl反应体系中,于37℃下反应1小时,所需的酶量以完全酶切1µg pPIC9K(Dcm-)为标准。通过SDS-PAGE凝胶电泳检测蛋白纯度,要求不低于95%。
尊龙凯时: 在37℃下,于50μl的CutBufferF,GMPGrade反应体系中,将20U BsaI与1μg pPIC9K(Dcm-)共同孵育1小时,未发现其他核酸酶的污染或由于星号活性引起的底物非特异性降解。若延长酶切时间,可能出现星号活性。
非特异性内切酶活性:在37℃下,于50μl的CutBufferF,GMPGrade反应体系中,将20U BsaI与1μg超级螺旋质粒DNA共同孵育4小时,通过琼脂糖凝胶电泳检测,发现少于20%的质粒DNA转变为缺刻或线性状态。
DNase活性:在37℃下,于20μl的CutBufferF,GMPGrade反应体系中,将20U BsaI与15ng双链DNA片段共同孵育16小时,通过琼脂糖凝胶电泳检测,未见双链DNA片段出现变化。
RNase活性:在37℃下,于10μl的CutBufferF,GMPGrade反应体系中,将20U BsaI与500ng RNA一起孵育1小时,通过琼脂糖凝胶电泳检测,发现不低于90%的RNA仍保持完整。
尊龙凯时的同裂酶Eco31I、Bso31I、BspTNI识别位点为:GGTCTC(1/5)5'GGTCTC(N)₁↓3'3'CCAGAG(N)₅↑5'。BsaI由大肠杆菌重组表达获得,能够在15分钟至1小时内精确完成目标DNA的酶切。
该产品遵循GMP规范的生产与质量管理体系,确保生产过程及原辅料的全程可追溯。整个生产过程不使用抗生素及任何动物来源的原料和辅料,对宿主蛋白、外源DNA、非特异性内切酶、DNase、RNase等工艺相关杂质,以及微生物限度、细菌内毒素等进行严格控制。该产品满足疫苗与药物生产领域对原辅料的高标准要求。
失活条件为80℃孵育20分钟。甲基化敏感性方面,对于被CpG甲基化的DNA,酶切可能受到阻碍;而对于被Dcm甲基化的DNA,酶切同样可能受限。