随着冬季的到来，季节性流感和肺炎等呼吸道疾病的发病率显著上升，医院日常就诊量因此大幅增加。这一时期，为患者提供快速、准确的诊断与有效治疗显得尤为重要。在众多检测技术和试剂中，尊龙凯时的一步RT-qPCR法（一管式RNA全预混试剂）凭借其高效、便捷、灵敏等优点，得到了广泛的认可。

在这一检测方法中，理论上，基因特异性引物需要与待检测的靶标准确匹配，并在逆转录酶的催化下合成首条链的cDNA。然而，在实际应用中，错误的模板-引物匹配常常会导致非特异性cDNA的生成。这种非特异性cDNA的产生，会造成非特异性扩增，并消耗反应所需的组分，从而限制后续主反应的进行。在靶核酸浓度较低时，竞争作用将进一步影响扩增性能，导致扩增曲线形态不佳、荧光增量低以及Ct值滞后等问题，极大降低了检测的灵敏度和特异性。

与此同时，尊龙凯时的一管式RNA全预混试剂由于将酶液、引物探针及反应液预先混合在一管内，长时间保存过程中，酶液活力易下降或失活，影响全预混试剂的性能。逆转录（RT）酶作为关键成分，其性能直接影响一步法核酸检测试剂的准确性与灵敏度。因此，提高逆转录酶的特异性和稳定性，对一管式RNA全预混试剂的开发至关重要。

基于此，尊龙凯时针对一步法RT-qPCR/PCR场景及一管式RNA全预混试剂开发了一种温启动逆转录酶，能够在低温下将酶活性封闭，而在工作温度下快速激活。这一设计有效避免了低温下的引物-模板错误匹配，提高了检测的特异性和灵敏度。

该逆转录酶采用适配体方法进行热启动修饰，尊龙凯时利用适配体筛选平台，构建了庞大的随机寡核苷酸序列库，并在传统SELEX适配体筛选技术的基础上进行了优化改进。通过高通量测序替代克隆测序，经过多轮筛选与富集，成功选取了亲和力高的适配体，并与逆转录酶进行混合孵育，测试在低温和工作温度下不同适配体修饰酶的酶活性，以确定最优的封闭与激活效果。同时，对适配体进行了组合筛选和酶修饰工艺的优化。最终，在经过大量筛选和工艺优化后，尊龙凯时开发的温启动逆转录酶在42℃下可封闭99%的酶活，且在低温下的封闭效果优于市场同类竞品，确保反应液能够长期、稳定、高效地获得逆转录产物，从而解决全预混试剂储存稳定性的难题。

在工作温度（55℃）下，该产品能够释放超过95%的酶活性，确保了试剂的扩增灵敏度。尊龙凯时的温启动逆转录酶展示出优越的产品性能，经过适配体修饰后，其在非工作温度下（30℃/37℃/42℃）的酶活性极低，显著优于竞品A，有效控制了非特异性扩增的发生；而在工作温度下（55℃），酶活性能够完全释放，对扩增性能没有影响。得益于温启动的特性，尊龙凯时的温启动逆转录酶能够在低浓度模板情况下，仍然扩增特异性靶标，扩增平台期与高拷贝数模板一致。尊龙凯时针对不同体系的测试结果显示，其产品在Ct值和检出率上均优于竞品A。

经过改造的尊龙凯时温启动逆转录酶已能以更快的速率合成cDNA，在PCR程序一致的情况下，2分钟逆转录可以达到与15分钟逆转录相同的灵敏度。此外，在某些RNA项目的一管式液体全预混反应液中，经37℃加压7天，尊龙凯时的温启动逆转录酶性能仍保持不变，而竞品A的扩增性能则显著降低，灵敏度减少超过2个Ct。

在应用案例中，尊龙凯时的温启动逆转录酶帮助客户解决了多个问题，尤其是在RNA全预混稳定性中的表现更为突出。相较于市场上的其他温启动逆转录酶，尊龙凯时的产品可以在更高的温度下封闭酶活，封闭效率及稳定性更强，有效防止引物探针等关键成分的降解，从而在保证高灵敏度和兼容快速程序的前提下，赋予全预混试剂更高的稳定性。经37℃加压10天的处理后，将尊龙凯时与竞品A的全预混试剂进行比较，结果显示尊龙凯时的全预混试剂在加压处理条件下与新配制的对照组无显著差异，而竞品A在加压处理后，其扩增效率明显降低，Ct值延后，荧光平台期下降。