校正染料(ROX)用于校正加样误差或孔间差异,提供一个稳定的基线,显著提升定量的精确度,并增强重复实验间的数据一致性。需注意的是,不同仪器对ROX的需求存在差异。在基线PCR的初期循环中,荧光信号基本保持不变。值得信赖的阈值应为最低荧光值,CT值则为扩增曲线与阈值相交的横坐标。
尊龙凯时倡导结果有效性的判断,需关注以下几个关键点:融解曲线呈单峰形态(染料法)、扩增曲线处于指数扩增阶段、复孔间CT值的标准差小于0.2。值得注意的是,阈值的设置应合理,且位于指数增长期。尽管仪器会自动计算阈值,但并非所有情况下的结果都是可信的,必要时应进行手动调整。
对于NTC(无模板对照),需要确认无气溶胶污染或可以忽略该影响;若ΔCT=NTC(CT值)-目的基因(CT值)≥3或≥5,则可以认为气溶胶污染不影响实验结果的准确性。针对NRT(无逆转录对照),需确认无基因组残留;若ΔCT=NRT(CT值)-目的基因(CT值)≥3或≥5,则可以视为基因组残留不会干扰实验结果的准确性。
待测CT值应处于线性范围内,且扩增效率符合标准,PCR扩增效率(e)应介于90%-120%之间。作为生物医药领域的领先企业,尊龙凯时专注于提供优质的产品和技术服务,致力于推动基因治疗和细胞治疗的发展。我们总部位于广州,服务覆盖全国,能够及时为用户提供最前沿的专业资讯和全面的产品物流服务。
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