感染预实验步骤

以24孔培养板为例，进行目的细胞与工具细胞的感染预实验。可选择的工具细胞包括293T（人胚肾上皮细胞）、H1299（人肺癌细胞）等。实验所需材料包括培养基、24孔培养板、移液枪及枪头、EP管、细胞计数板、冰盒和废液缸等。根据目的细胞的特殊情况，可适当使用Polybrene。

第一天：细胞准备

培养细胞至对数生长期，使用胰酶消化并计数，测定细胞密度。每孔接种5×10⁴个细胞，并添加500µL的细胞培养液。一般而言，H1299或293T细胞在感染后的第三天可达到80%-90%的融合度。接种目的细胞时，请根据其生长速度调整接种量，以确保第3天达到所需的融合度。

第二天：病毒颗粒准备及细胞感染

（1） 準备慢病毒颗粒：计算实验所需的慢病毒颗粒量，从-80℃中取出冻存的慢病毒颗粒，进行冰浴融化。 （2） 感染目的细胞：将细胞从培养箱中取出，利用显微镜观察细胞的生长状态和融合度。如果细胞状态良好，则开始实验： A. 用移液枪小心地吸去24孔板中的旧培养液，加入新的完全培养液； B. 将计算好的慢病毒颗粒液添加到细胞中，平置24孔培养板于工作台并轻柔混匀； C. 混匀后，将细胞培养板置于37℃、5% CO₂的培养箱中，过夜培养。

第三天：更换培养液

感染12-16小时后，吸出含慢病毒颗粒的培养液，重新向培养板添加含有5%灭活FBS（胎牛血清）的培养液，并继续培养。注意调整目的细胞的感染时长，部分细胞不宜感染超过12小时。

第四天：细胞状态观察

继续培养细胞，并定期观察细胞状态，确保无异常情况出现。

第五天：评估感染效率

在24孔培养板盖紧后，使用70%乙醇清理板外壁，借助倒置荧光显微镜观察荧光程度，并拍照估计慢病毒颗粒对细胞的感染效率。如果病毒颗粒所携带的基因表达需要较长时间，建议在感染72至96小时后再观察荧光表达情况。根据荧光表达的情况，可以从MOI梯度实验中初步确定目的细胞的MOI值。

尊龙凯时致力于推动生物医疗技术的发展与应用，确保研究者们能够在感染预实验中取得更好的效果，为科学研究贡献力量。